CRNDE, a long-noncoding RNA, promotes glioma cell growth and invasion through mTOR signaling

日期：2017-07-14 標簽：LncRNA,CRNDE,histone,acetylation

組蛋白乙?；芯堪咐ㄒ唬?/span>

（一）調控通路：

（二）實(shí)驗流程：

作者首先用Q-PCR檢測臨床樣本神經(jīng)膠質(zhì)瘤/癌旁組織細胞的LncRNA表達，然后分析LncRNA CRNDE轉錄本。作者從功能和機制兩方面研究LncRNA CRNDE。（1）LncRNA CRNDE的功能是促進(jìn)癌細胞生長(cháng)：通過(guò)建立CRNDE過(guò)表達/敲低穩定株進(jìn)行CCK8實(shí)驗、劃痕實(shí)驗、Transwell、小鼠體成瘤實(shí)驗檢測CRNDE功能。（2）調控機制研究：首先用WB方法檢測正常細胞和膠質(zhì)瘤細胞的mTOR通路相關(guān)蛋白的表達，然后用P300/CBP抑制劑處理細胞作為對照，WB檢測CRNDE敲低后的P70S6K的磷酸化說(shuō)明CRNDE促進(jìn)P70S6K的磷酸化。之后，作者用CHIP實(shí)驗檢測CRNDE啟動(dòng)子與組蛋白成分以及P300/CBP的結合情況來(lái)說(shuō)明P300/CBP結合到啟動(dòng)子上促進(jìn)組蛋白乙?；?，最后通過(guò)檢測P300/CBP敲低后CRNDE的表達說(shuō)明P300/CBP促進(jìn)CRNDE的表達。

（三）核心FIGURE:

Figure1說(shuō)明的是LncRNA CRNDE的啟動(dòng)子被p300乙?；?。

A、 CHIP實(shí)驗，用P300抗體從癌細胞U87MG和非癌細胞NHA釣取與P300結合的DNA片段，Q-PCR檢測表明LncRNA CRNDE啟動(dòng)子與P300結合在癌細胞中比非癌細胞明顯增多。

B、 ChIP實(shí)驗，分別用甲基化和乙?；鞍卓贵w釣取DNA片段，結果表明癌細胞的LncRNA CRNDE啟動(dòng)子乙?；黾?。

C、 Q-PCR檢測細胞中LncRNA CRNDE的表達，si-P300的細胞LncRNA表達量明顯下降。

Figure2說(shuō)明的是LncRNA CRNDE通過(guò)P70S6的磷酸化激活mTOR信號通路調控腫瘤基因相關(guān)基因和抑癌因子的表達

A、 Western Blot檢測癌細胞和非癌細胞中P70S6和其磷酸化情況。

B、 用Western Blot檢測受mTOR抑制劑處理后的P70S6的磷酸化，然后用Q-PCR檢測c-myc、cyclinD1、p53、PTEN基因的表達，結果是mTOR抑制后P70S6磷酸化下降，癌細胞增殖相關(guān)基因c-myc、cyclinD1表達下降，抑癌因子表達升高。

C、 用Western Blot檢測sh-CRNDE的P70S6的磷酸化，然后用Q-PCR檢測c-myc、cyclinD1、p53、PTEN基因的表達，結果與使用mTOR抑制劑處理一致。

本公司可提供的技術(shù)服務(wù)項目

本公司可進(jìn)行以上類(lèi)似實(shí)驗的實(shí)驗設計及整體實(shí)驗外包項目，包括CHIP、慢病毒穩轉株的建立（過(guò)表達/敲低）、q-pcr、WB，其中CHIP為本公司主營(yíng)項目。

一、CHIP技術(shù)：主要研究蛋白與基因啟動(dòng)子之間的關(guān)系

本實(shí)驗分別用P300和PolII抗體從癌細胞U87MG和非癌細胞NHA釣取與P300、PolII結合的DNA片段，q-pcr檢測表明癌細胞的LncRNA CRNDE啟動(dòng)子與P300結合與非癌細胞相比明顯增多。

參考文獻：Yunliang Wang, Yutong Wang,Jinfeng Li，et al. CRNDE, a long-noncoding RNA, promotes glioma cell growth and invasion through mTOR signaling［J］.Canlet.2015,03,027