CRISPER-Cas9系統的組成

CRISPR Cas9靶向基因組編輯系統有兩個(gè)組成部分：①內切核酸酶-Cas9和②指導RNA-gRNA（圖2）。內切核酸酶是來(lái)自釀膿鏈球菌的Cas9核酸酶蛋白。 Cas9核酸酶具有切割雙鏈DNA的活性結構域（RuvC1和HNH樣核酸酶結構域），使得雙鏈DNA斷裂。 gRNA是由起支架功能的tracrRNA與特異性的crRNA結合形成的嵌合RNA。后來(lái)，人們將這兩段RNA拼接成一條短RNA，稱(chēng)為sgRNA。 gRNA 5'末端的20bp是特異性的結合序列-尋靶裝置，通過(guò)RNA-DNA堿基配對將Cas9 / gRNA復合物募集到特異的DNA靶點(diǎn)。特異性結合序列相鄰的是PAM（Protospacer Adjacent Motif）基序。PAM基序是內切核酸酶Cas9的識別位點(diǎn)，Cas9的PAM基序為5'-NGG。Cas9核酸酶在PAM基序上游第3個(gè)堿基處切割雙鏈DNA。

Figure 2 ：The last 20 base pairs of the gRNA acts as a homing device, recruiting the Cas9 endonuclease to the appropriate target sequence. Once there, the two cleavage domains of the Cas9 create a double stranded break 3 or 4 base pairs downstream of the PAM sequence. The DSB is then repaired by either the error-prone non-homologous end joining repair pathway, or the template-dependent homology directed repair

• 1 . CRISPR-Cas9系統
  • 1.1. CRISPR-Cas9組成
  • 1.2. 作用機制
  • 1.3. 不同的Cas9系統
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系統
• 2 . CRSPER- dCas9系統
  • 2.1. dCas9-轉錄調控系統
  • 2.2. dCas9-基因激活與抑制系統
  • 2.3. dcas9-表觀(guān)遺傳系統
• 3 . dCas9技術(shù)路線(xiàn)
  • 3.1. gRNA設計
  • 3.2. dCas9實(shí)驗流程
  • 3.3. 實(shí)驗問(wèn)題與解決方案