CRISPR dCas9—轉錄調控系統

      2013年，齊等人將來(lái)自化膿性鏈球菌的Cas9的核酸酶結構域（在HNH結構域中產(chǎn)生H840A突變和在RuvC結構域中產(chǎn)生D10A突變）進(jìn)行突變，以產(chǎn)生核酸酶缺陷的“dCas9”。這種“鈍化”和“死亡”Cas9失去切割DNA的功能，但在gRNA的指導下仍能以相同的精確度靶向和結合DNA。

      dCas9蛋白可以與效應器（如阻遏蛋白和激活劑結構域）形成融合蛋白，這樣，dCas9可以將這些效應器帶到啟動(dòng)子區域、調控區域或編碼區域，對任何基因進(jìn)行精確定點(diǎn)調控而不造成DNA損傷?？捎糜谘芯哭D錄因子或輔助轉錄因子對特定基因的影響。

Figure 1 :dCas9 as a modular system for attachment of transcriptional regulators. dCas9 can easily be fused to effectors (either transcription activators or repressors) for targeted gene regulation. Adapted from Figure 1a of Gilbert et al. (2013).

• 1 . CRISPR-Cas9系統
  • 1.1. CRISPR-Cas9組成
  • 1.2. 作用機制
  • 1.3. 不同的Cas9系統
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系統
• 2 . CRSPER- dCas9系統
  • 2.1. dCas9-轉錄調控系統
  • 2.2. dCas9-基因激活與抑制系統
  • 2.3. dcas9-表觀(guān)遺傳系統
• 3 . dCas9技術(shù)路線(xiàn)
  • 3.1. gRNA設計
  • 3.2. dCas9實(shí)驗流程
  • 3.3. 實(shí)驗問(wèn)題與解決方案