CRISPR-dCas9實(shí)驗流程

實(shí)驗步驟 ：  

1.設計sgRNA

  按照“20N+NGG(PAM)”的設計原理設計sgRNA，至少設計3條。

2.構建sgRNA和dCas9-target 質(zhì)粒

3.構建dCas9-target穩轉株

  穩轉株蛋白構建完成后，用flag抗體或目的蛋白抗體檢測穩轉株是否構建成功，如果載體上有熒光蛋白，可用熒光檢測細胞株是否構建成功。

圖3 熒光檢測圖片  A轉染篩選后明場(chǎng)圖片   B轉染篩選后熒光圖片 C未轉染加嘌呤篩選細胞

4.Flag-ChIP-QPCR驗證sgRNA的工作效率

  將sgRNA轉染至dCas9-target穩轉株中，ChIP檢測sgRNA的工作效率。

• 1 . CRISPR-Cas9系統
  • 1.1. CRISPR-Cas9組成
  • 1.2. 作用機制
  • 1.3. 不同的Cas9系統
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系統
• 2 . CRSPER- dCas9系統
  • 2.1. dCas9-轉錄調控系統
  • 2.2. dCas9-基因激活與抑制系統
  • 2.3. dcas9-表觀(guān)遺傳系統
• 3 . dCas9技術(shù)路線(xiàn)
  • 3.1. gRNA設計
  • 3.2. dCas9實(shí)驗流程
  • 3.3. 實(shí)驗問(wèn)題與解決方案