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基因表達調控實(shí)驗技術(shù)
基因表達調控一般分為轉錄前的調控、轉錄過(guò)程的調控和轉錄后調控。轉錄前的調控包括基因組DNA的修飾和組蛋白的修飾,這里可能涉及到修飾酶與啟動(dòng)子互作、LncRNA與修飾酶與啟動(dòng)子的互作,可以通過(guò)CHIP、RIP、co-IP、RNA pull down、DNA pull-down等實(shí)驗技術(shù)進(jìn)行驗證;轉錄過(guò)程的調控包括轉錄因子或轉錄抑制因子對基因啟動(dòng)子的作用,LncRNA與轉錄因子互作,LncRNA與基因互作等,這些可以通過(guò)啟動(dòng)子Luciferase活性、CHIP、RIP、CLIP、CHIRP、RNA pull down、DNA pull-down、DNA EMSA、RNA-蛋白FISH等實(shí)驗技術(shù)進(jìn)行驗證;轉錄后調控包括LncRNA與mRNA互作、LncRNA與microRNA互作(ceRNA機制)、microRNA與mRNA互作、LncRNA與mRNA結合蛋白互作等,可通過(guò)3’-UTR Luciferase活性、RIP、CLIP、RNA pull down、RNA-RNA pull-down、RNA EMSA、RNA-蛋白FISH、RNA-RNA FISH等實(shí)驗技術(shù)進(jìn)行驗證。對于一種RNA或蛋白參與的是基因表達調控哪個(gè)階段,可以通過(guò)核質(zhì)分離和FISH進(jìn)行細胞的定位初步確定,位于細胞核的一般參與的是轉錄前和轉錄過(guò)程的調控,位于細胞質(zhì)的一般參與轉錄后的調控。
下面我們將介紹在基因表達調控中所用到的一些關(guān)鍵的實(shí)驗技術(shù)服務(wù)項目。
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