DNA pull-down

針對目標區域設計特異性DNA探針并經(jīng)過(guò)脫硫生物素標記，脫硫生物素探針可以和偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素親和結合。然后，細胞核提取物與磁珠-DNA探針?lè )跤?，作用蛋白質(zhì)分子可以和DNA探針特異性結合；經(jīng)過(guò)洗滌可以將非特異性結合蛋白質(zhì)去除；最后，經(jīng)洗脫液洗脫，得到目的DNA探針-蛋白質(zhì)復合物，再經(jīng)過(guò)Western Blot或質(zhì)譜（MS）鑒定蛋白質(zhì)類(lèi)型。

在DNA pull-down實(shí)驗過(guò)程中我們設置一系列的質(zhì)控標準以確保每一步實(shí)驗的真實(shí)有效，如DNA探針跑膠檢測、產(chǎn)物銀染圖。具體示例如下圖所示：

上圖為DNA探針跑膠圖，保證了DNA探針的質(zhì)量。

DNA pull-down產(chǎn)物通過(guò)跑膠銀染檢測實(shí)驗組與對照組是否含有差異條帶，以確保結果的可靠性。

DNA pull-down實(shí)驗結果一般為產(chǎn)物的WB驗證或MS分析數據，下圖為DNA pull-down產(chǎn)物的WB結果示例。

用非生物素標記的DNA探針作為陰性對照，表明目的DNA片段能與預測的靶標蛋白結合。

• 1 . 基因表達調控
  • 1.1. 表觀(guān)遺傳修飾調控
  • 1.2. 轉錄水平調控
  • 1.3. 轉錄后水平調控
• 2 . 基因表達調控實(shí)驗技術(shù)
  • 2.1. CHIP 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)
  • 2.2. RIP RNA結合蛋白免疫沉淀技術(shù)
  • 2.3. CHIRP 免疫共沉淀實(shí)驗
  • 2.4. CLIP實(shí)驗技術(shù)
  • 2.5. RNA pull-down
  • 2.6. DNA pull-down
  • 2.7. RNA-RNA pull-down
  • 2.8. Luciferase 熒光素酶實(shí)驗
  • 2.9. DNA/RNA EMSA 凝膠電泳遷移實(shí)驗
  • 2.10. FISH 免疫熒光原位雜交技術(shù)
  • 2.11. ?核質(zhì)分離