RIP RNA結合蛋白免疫沉淀技術(shù)

RIP技術(shù)（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA結合蛋白免疫沉淀），是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術(shù)，是了解轉錄后調控網(wǎng)絡(luò )動(dòng)態(tài)過(guò)程的有力工具。RIP這種新興的技術(shù)運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來(lái)，經(jīng)過(guò)分離純化就可以對結合在復合物上的RNA進(jìn)行分析。

在RIP實(shí)驗過(guò)程中我們設置一系列的質(zhì)控標準以確保每一步實(shí)驗的真實(shí)有效，如WB檢測抗體和蛋白的表達，最后產(chǎn)物qTR-PCR檢測的跑膠圖。具體示例如下圖所示：

WB檢測抗體的效果和RNA結合蛋白的表達。

RIP-qPCR實(shí)驗后，體系內的RNA反轉錄片段擴增物進(jìn)行DNA電泳，檢測qPCR擴增產(chǎn)物是否和設計相符，以及檢測是否有引物二聚體產(chǎn)生影響實(shí)驗。

RIP實(shí)驗結果一般為產(chǎn)物的Q-PCR結果數據或者高通量測序數據，如圖為RIP產(chǎn)物的Q-PCR結果示例。

RIP產(chǎn)物的qPCR 檢測結果，從結果可看出EZH2蛋白能與圖示的幾種RNA結合互作。

• 1 . 基因表達調控
  • 1.1. 表觀(guān)遺傳修飾調控
  • 1.2. 轉錄水平調控
  • 1.3. 轉錄后水平調控
• 2 . 基因表達調控實(shí)驗技術(shù)
  • 2.1. CHIP 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)
  • 2.2. RIP RNA結合蛋白免疫沉淀技術(shù)
  • 2.3. CHIRP 免疫共沉淀實(shí)驗
  • 2.4. CLIP實(shí)驗技術(shù)
  • 2.5. RNA pull-down
  • 2.6. DNA pull-down
  • 2.7. RNA-RNA pull-down
  • 2.8. Luciferase 熒光素酶實(shí)驗
  • 2.9. DNA/RNA EMSA 凝膠電泳遷移實(shí)驗
  • 2.10. FISH 免疫熒光原位雜交技術(shù)
  • 2.11. ?核質(zhì)分離