DNA/RNA EMSA 凝膠電泳遷移實(shí)驗

凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）是一種研究DNA/RNA結合蛋白和其相關(guān)的DNA/RNA結合序列相互作用的技術(shù)，可用于研究DNA/RNA結合蛋白和其相關(guān)的DNA/RNA結合序列相互作用、DNA/RNA定性和定量分析。生物素標記的探針依研究的結合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。

如上圖所示，DNA-復合物比非結合的探針移動(dòng)得慢；當檢測DNA結合蛋白，可用純化蛋白、部分純化蛋白或核細胞抽提液；競爭實(shí)驗中采用含蛋白結合序列的DNA片段和寡核苷酸片段（特異）和其它非相關(guān)的片段（非特異），來(lái)確定DNA結合蛋白的特異性；在競爭的特異和非特異片段的存在下，依據復合物的特點(diǎn)和強度來(lái)確定特異結合。

在EMSA實(shí)驗過(guò)程中我們設置一系列的質(zhì)控標準以確保每一步實(shí)驗的真實(shí)有效，如DNA片段PCR擴增跑膠圖、體外轉錄產(chǎn)物跑膠圖。具體示例如下圖所示（DNA EMSA）：

EMSA探針跑膠檢測：

EMSA結果為凝膠電泳遷移圖，示例如下圖所示：

組別1為陰性對照；組別2中生物素標記的檢測基因（LXRE2）與蛋白結合，出現條帶遷移；組別3中沒(méi)有標記的基因（LXRE）競爭性與蛋白結合，LXRE2條帶不遷移；組別4中對LXRE進(jìn)行突變，LXRE2條帶重新發(fā)生遷移。從實(shí)驗結果可以明確LXRE2為與調控蛋白特異結合的位點(diǎn)。

• 1 . 基因表達調控
  • 1.1. 表觀(guān)遺傳修飾調控
  • 1.2. 轉錄水平調控
  • 1.3. 轉錄后水平調控
• 2 . 基因表達調控實(shí)驗技術(shù)
  • 2.1. CHIP 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)
  • 2.2. RIP RNA結合蛋白免疫沉淀技術(shù)
  • 2.3. CHIRP 免疫共沉淀實(shí)驗
  • 2.4. CLIP實(shí)驗技術(shù)
  • 2.5. RNA pull-down
  • 2.6. DNA pull-down
  • 2.7. RNA-RNA pull-down
  • 2.8. Luciferase 熒光素酶實(shí)驗
  • 2.9. DNA/RNA EMSA 凝膠電泳遷移實(shí)驗
  • 2.10. FISH 免疫熒光原位雜交技術(shù)
  • 2.11. ?核質(zhì)分離